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徠卡冰凍式切片機(jī)切片制樣方法

更新時(shí)間:2013-08-27   點(diǎn)擊次數(shù):3161次

 徠卡冰凍式切片機(jī)切片制樣方法

 
電鏡樣品制備技術(shù)直接影響樣品的結(jié)構(gòu)和反差。制備高質(zhì)量的超薄切片,是發(fā)揮透
 
射電子顯微鏡優(yōu)良性能的前提。透射電子顯微鏡的分辨率理論上可達(dá)到o.3nm左右,
 
但是六于樣品制備技術(shù)的限制,分辨率很難達(dá)到理論值。對(duì)于生物樣品來說,一般只能
 
達(dá)到2nm的水平。
 
高質(zhì)量的超薄切片基本特征:①樣品應(yīng)該能耐受電子束的強(qiáng)烈照射.不變形和升華
 
等。②能進(jìn)行屯了染色.提高反差。③l50一100kv加速電壓范圍內(nèi),切片厚度在
 
50—loonm。④樣品必須*下燥,以保持電鏡L作狀態(tài)F不損傷。
 
超揍切片技術(shù)包括取樣、固定、脫水、滲透、包埋、超薄切片、電子染色、鏡檢等
 
制樣步驟。其中取樣、固定、脫水、滲透、包埋等過程與半博團(tuán)片制樣方法相同,下面
 
重點(diǎn)介紹超薄切片的準(zhǔn)備、超薄切片和電子染色等過程。
 
一、徠卡冰凍式切片機(jī)切片制樣步驟
 
1.銅網(wǎng)清洗:超薄切片要放在載網(wǎng)上才能進(jìn)行染色等操作,并zui終放到電鏡中觀察。載網(wǎng)是用元磁性金屬材料做成的,厚50Pm,直徑一般為3咖,也有2皿的。一般用銅材料,所以又叫銅網(wǎng)。在酶組織化學(xué)或免疫細(xì)胞化學(xué)中要用金網(wǎng)和鎳網(wǎng),載網(wǎng)有各種形狀。可根據(jù)樣品和實(shí)驗(yàn)需要,選擇載網(wǎng)的材質(zhì)、形狀和孔眼的大小。銅網(wǎng)主要功能是承載支持膜和樣品。當(dāng)受到電子束照射時(shí),支持膜不易破裂*照射到銅網(wǎng)網(wǎng)孔中的電子,穿過樣品,通過透鏡成像。碰到銅網(wǎng)載條上的電子,被傳到地,不參與成像,因此銅網(wǎng)還有把樣品上的熱量傳走,減少樣品的熱漂移。銅網(wǎng)要經(jīng)過清洗,方可使用。目前清洗的方法主要有下列幾種:①超聲波清洗法:將用過的銅網(wǎng)放在盛有95%乙醇的燒杯里,置于超聲波清洗器(其內(nèi)有水)中,在800一1000w下清洗30min。將使用過的銅網(wǎng)上的支持膜及超薄切片等洗去。然后用蒸餾水清洗數(shù)次,再在95%乙醇中清洗,zui后放在墊有干凈濾紙的培養(yǎng)皿中烘干.鏡檢,備用。②酸堿清洗法:將用過的銅網(wǎng)放在一培養(yǎng)皿中,倒入一些濃硫酸或濃鹽酸,不斷地?fù)u動(dòng)(3—5min),直到銅網(wǎng)發(fā)亮為止。然后先用自來水,后用蒸餾水洗幾次,再放在95%乙醇中清洗,zui后放到墊有干凈濾紙的培養(yǎng)皿中烘下,鏡檢,備用。也可將銅網(wǎng)放在盛有10%NaoH的小錐瓶或試管中煮沸數(shù)分鐘,然后用水洗,干燥、鏡檢,備用。
 
備注:徠卡冰凍式切片機(jī)切片制樣方法由北京中儀光科科技有限公司編輯整理上傳。
 
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