徠卡倒置熒光顯微鏡關(guān)于組織塊的體積
徠卡倒置熒光顯微鏡到目前為止，冰涼固定，冰凍超薄切片及冰凍干操是組織及細(xì)胞x線微區(qū)的常規(guī)方法。對該方法的細(xì)節(jié)做以下幾點(diǎn)說明：
徠卡倒置熒光顯微鏡一個非常重要的問題是在取材和分離細(xì)胞過程，冰凍干燥和樹脂包埋（FD）后冰凍超簿團(tuán)片后，冰凍干燥后細(xì)跑各部位65元素成分含量中必須處理十分仔細(xì)，絕不能損傷待觀察分析的細(xì)胞。因?yàn)樽鱴線微區(qū)分析不但步驟繁多，而且成本甚高，如果經(jīng)過長時間及多步驟的處理后，所分析的細(xì)胞是受損傷的細(xì)胞或死細(xì)胞，得出錯誤的結(jié)論是非常遺憾的。如經(jīng)過膠元酶處理分離出的心肌細(xì)胞有兩種形態(tài)，一種是長桿狀，另一種是圓形。后者是在細(xì)胞分離過程中受損傷的瀕死細(xì)胞。
徠卡倒置熒光顯微鏡有聚光鏡的顯微鏡則可將聚光鏡作上下移動使其亮度適中，另外也可以改變可變光闡的孔徑以達(dá)到適中9b亮度。如果光線太陽時，則可將聚光鏡作適當(dāng)?shù)南蛏仙勺児怍[的孔徑作適當(dāng)?shù)姆糯蟆Ｈ绻饩€太強(qiáng)則可將聚光鏡作適當(dāng)?shù)南陆担山还忾c的孔徑作適當(dāng)?shù)臏p小。假如在這種情況下還感到刺眼，那末可選用適當(dāng)?shù)臑V光片放置在聚光鏡下的托架上。這柞就能獲得使你滿意的亮度。當(dāng)然在調(diào)節(jié)聚光鏡的上下位置利可變光閱的孔徑大小以及選用適合的濾光片，那是要經(jīng)過一定時期的實(shí)踐而取得經(jīng)驗(yàn)的。
徠卡倒置熒光顯微鏡這兩種細(xì)胞中電解質(zhì)的含量及分布十分不同。圓形心肌細(xì)胞中Na甚高而K極低，線枝體中的ca濃度十分高。經(jīng)過與其它分析方法核對，證明圓形細(xì)胞高Na低K及線粒體內(nèi)高ca是由于在細(xì)胞分離過程中細(xì)胞膜受損傷的結(jié)果。細(xì)胞及組織的冰涼固定方法往往是先采取淬冷固定，然后放入液氮中保存。淬冷固定對于保存的效果十分重要。活細(xì)胞或新鮮組織中富含水分，當(dāng)淬冷時往往是細(xì)胞或組織與碎冷劑（特別是用液氮粹冷時）直接接觸的部位先冷凍固定，因而形成一個“殼”，便妨礙了細(xì)胞的中心部位碎冷固定。因此在作x一線微區(qū)分析時，常常發(fā)現(xiàn)較大的細(xì)胞的中心部位有冰晶存在。為了防止這種情況發(fā)生，便使用熔點(diǎn)比液氮高但低干一806c的物質(zhì)作碎冷劑。這類物質(zhì)很多，但zui易獲得，價(jià)格低廉的是濃態(tài)丙烷（沸點(diǎn)一42．120c，熔點(diǎn)一187．10c，分子量44．1），冷卻速度也zui快。但其缺點(diǎn)是易燃。具體操作如下，對固定單根肌纖維而言。
徠卡倒置熒光顯微鏡可將肌纖維放在一特制的架上，使該肌纖維收縮達(dá)到某時相需要固定時，立即啟動噴咀，使液態(tài)丙烷向肌纖維噴射，使之淬冷固定。然后再將肌纖維連同架子取出投入液氮中。如果固定血細(xì)胞或分離的細(xì)胞，首先低速離心使細(xì)胞集中，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一個導(dǎo)熱性能良好的銀質(zhì)小管中、將該小管放入液態(tài)丙烷中獰冷固定。Hall實(shí)驗(yàn)室固定大鼠胰腺時，先將兩鋼塊用液氦（或液氮）預(yù)冷，用鉗夾住兩銅塊將其放在胰腺前后，使姨腺淬冷固定。組織或細(xì)胞淬冷固定后轉(zhuǎn)移到液氮中可長期保存。
徠卡倒置熒光顯微鏡除目前zui推崇的冰凍超薄切片法外，在這里再介紹一種科學(xué)家們用過的沉積技術(shù)。在進(jìn)行分析前加入一種物質(zhì)，使之與待分析的成份形成沉積物以固定它，然后分析該沉積物。例如，人們常用草酸鹽與焦銻酸鹽去沉積肌細(xì)胞中的ca。前者對胞漿中低濃度的ca敏感性不夠高；焦銻吱鹽的敏感性高些，可與腦漿中游離ca形成電子致密的沉積物，但焦銻酸鹽與鈉、錳、鋇、鐵也形成沉積物，特異性較差。標(biāo)本制備過程類似于普通透射電鏡超薄切片標(biāo)本的制備，不同之處在于固定前3％焦銻酸鉀（磷酸鹽緩沖液，pH7．6）固定6小時，在染色的肌肉超薄切片上，在每個肌節(jié)的A帶和2帶的中線可見黑色沉淀物、再用未染色的切片做X射線微區(qū)分析。曾用二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸（DAB）去沉淀含血紅素的物質(zhì)等等。這種組化的沉淀反應(yīng)與x射線微區(qū)分橋聯(lián)合應(yīng)用在不具備冰凍超薄切片條件的實(shí)驗(yàn)室可考慮采用。根據(jù)待分析元素的峰高可做半定量。
