徠卡生物顯微鏡的局限

徠卡生物顯微鏡的工作目標(biāo)是對樣品得到一個放大俄，使原來肉眼看不見的細(xì)節(jié)能變得清晰可見。這里有兩個基本的性能指標(biāo)：一是分辨率極限，二是zui高有效放大倍數(shù)。分辨宰是分辨物體細(xì)節(jié)的zui小極限。儀器可分辨的zui小細(xì)節(jié)經(jīng)適當(dāng)放大后，變成人眼所能看清者。顯然，如果超越了儀器分辨率的能力，即使進(jìn)一步提高放大倍數(shù)，也不能讓人清晰看到更小的細(xì)節(jié)。這種現(xiàn)象必須借助于光的波動學(xué)說來解釋。

徠卡生物顯微鏡中所用的可見光源是波長為400一800nm的電磁波。波傳播的特性之一是衍射。衍射就是波遇到障礙物時能偏離直線傳播的性質(zhì)。根據(jù)基礎(chǔ)物理知識可知，由于實際光學(xué)儀器都有限制光束的“窗口”（光學(xué)顯微鏡中的“窗口”就是物鏡邊緣所限制的透光范圍），它造成的衍射效應(yīng)會使每個物點形成的像都是有所擴(kuò)展的衍射光斑?？康锰南顸c彼此重登起來，會使畫面中的細(xì)節(jié)變得模糊不清。光學(xué)顯微鏡中還有一些像差（如球差和色差等）也會使像點展寬，但它們大多可以校矯正。所以衍射差就成了限制光學(xué)顯微鏡分辨率的*重要因素。

根據(jù)Huy8en分FmsMl原理可以得出：一個物點所形成的衍射像斑是一種強(qiáng)度大部分（約84％）集中在中心圓斑，而周圍伴有強(qiáng)度逐漸減弱的若干離散同心環(huán)的衍射花樣。中心圓斑（也稱A卸因斑）的半徑。像方物鏡孔徑角或電子束半張角。光學(xué)儀器中通常采用Rayl出gh

判據(jù)作為分辨率的標(biāo)準(zhǔn)，即當(dāng)一個囚斑像約中心剛好落在另一相鄰圓斑像的邊緣上時，這兩個恰好能被分辨。因此圖像上可分辨的zui小距離眾就是Airy團(tuán)斑的半徑。燈是顯微鏡物鎊所決定的圖像放大倍數(shù)），便可以把像上的分辨率品轉(zhuǎn)換成對物方樣品的分辨率成。

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